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ELISA試劑盒中顯色劑A,B順序可以顛倒么?

 更新時(shí)間:2019-09-04 點(diǎn)擊量:5436

關(guān)于顯色AB加入的順序本人還是應(yīng)該有比較大的關(guān)系的!那么顯色液中A是過(guò)氧化氫 顯色液是TMB 一般都是這兩種,那么應(yīng)該怎么去理解呢說(shuō)明書說(shuō)先加A再加B ,其實(shí)得根據(jù)HRP跟TMB跟H2O2的反應(yīng):HRP+H2O2+DH2(色原底物其實(shí)就是TMB)==2H20+藍(lán)色陽(yáng)離子根 +終止液(硫酸)==黃色聯(lián)苯坤
HRP催化H202產(chǎn)生氧,然后與TMB反應(yīng),所以這里如果A先加進(jìn)去跟HRP充分反應(yīng)的話然后再加入TMB讓氧離子跟TMB充分反應(yīng),可能顯色的結(jié)果會(huì)好一點(diǎn)!
由于TMB這種色原底物反應(yīng)后如果終止液中混有還原劑的話,可以產(chǎn)生逆反應(yīng)導(dǎo)致藍(lán)色褪色!但是這種情況應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)吧!
還有洗板機(jī)的問(wèn)題,如果覺(jué)得洗的不干凈,用純水沖一遍!沖的話也是直接往板里倒水!根本就不用考慮什么交叉問(wèn)題!因?yàn)槿绻舯谶@個(gè)陽(yáng)性標(biāo)本的血清跑到隔壁去沒(méi)經(jīng)過(guò)孵育就可以結(jié)合的話,那我剛開(kāi)始還要孵育干嘛,直接加完樣洗掉就可以啦! 

后總結(jié)建議還是按說(shuō)明說(shuō)上的來(lái)操作,確保結(jié)果。