大鼠免疫球蛋白M(IgM) ELISA試劑盒的原理是基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA),它包括固相孔板、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、樣品和檢測(cè)試劑。
1. 固相孔板涂層:將特異性抗大鼠IgM的單克隆抗體或多克隆抗體固定在微孔板上,形成捕獲抗體層。這些抗體可以與大鼠IgM特異性結(jié)合。
2. 樣品處理:需要對(duì)收集到的生物樣本進(jìn)行預(yù)處理,通常是對(duì)血清或其它組織液進(jìn)行稀釋?zhuān)源_保測(cè)試結(jié)果可靠和準(zhǔn)確。
3. 反應(yīng)過(guò)程:
- 加入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品和待測(cè)樣品到不同的阱中。
- 孵育:讓適當(dāng)時(shí)間內(nèi)的溶液內(nèi)發(fā)生反應(yīng),在適當(dāng)溫度下使得被檢測(cè)物與捕獲抗體結(jié)合。
- 洗滌:去除未結(jié)合物質(zhì)
- 加入檢測(cè)試劑:將辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的第二抗體加入每個(gè)阱中,并與已經(jīng)和目標(biāo)分子結(jié)合在一起的分子形成一個(gè)復(fù)合物。
- 孵育:讓檢測(cè)試劑和目標(biāo)復(fù)合物在適當(dāng)溫度下發(fā)生反應(yīng),進(jìn)一步增加信號(hào)強(qiáng)度。
- 洗滌:去除未結(jié)合的檢測(cè)試劑
- 加入底物:加入含有HRP底物的溶液,在適當(dāng)時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生可測(cè)量的顏色或發(fā)光信號(hào)。
4. 反應(yīng)讀取與數(shù)據(jù)分析:使用專(zhuān)用設(shè)備(如酶標(biāo)儀)對(duì)孔板上各阱中形成的顏色或熒光進(jìn)行定量讀取,并將結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較,從而確定樣品中大鼠IgM水平。
通過(guò)該ELISA原理,可以靈敏地檢測(cè)大鼠體內(nèi)IgM抗體水平,并提供定量信息。