說(shuō)明：ELISA操作嚴(yán)格要求定當(dāng)做出好實(shí)驗(yàn)。

　　按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗刷的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。ELISA試劑盒自配的緩沖液使用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的實(shí)驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用。試劑盒中本次實(shí)驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。

　　為確保試驗(yàn)的成功，使用ELISA試劑盒時(shí)必定要注意相關(guān)的事項(xiàng)。

　　1， 確認(rèn)本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。

　　2， 將倍比稀釋的規(guī)范品各0.1ml順次參加一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔參加。

　　3， 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反響90分鐘。

　　4， 反響后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗刷2次。

　　5，將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。

　　6， 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次，每次浸泡1分鐘左右。

　　7，將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。

　　8， 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次，ELISA試劑盒每次浸泡1-2分鐘左右。

　　9， 按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液，37℃避光反響，反響過(guò)程中，要常常的調(diào)查，當(dāng)肉眼可見(jiàn)規(guī)范品的前3-4孔有顯著的梯度藍(lán)色，后3-4孔不同不顯著時(shí)，即可參加TMB停止液0.1ml/孔。（顯色反響長(zhǎng)不要超越30分鐘）。

　　10，用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。

　　11，根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也能夠使用各種應(yīng)用軟件來(lái)核算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。