ELISA實驗中常見的問題您知道嗎？如果您是新手小白，恭喜您看到這篇文章，這篇ELISA實驗干貨請您收好了！

　　一、剩余的試劑盒材料要妥善保存

　　標(biāo)準(zhǔn)品分裝后按說明書要求的溫度保存，這樣可以避免污染，對要求冷凍保存的標(biāo)準(zhǔn)品還可以避免反復(fù)凍融；酶標(biāo)板放回錫箔紙袋，加入干燥劑，封緊封口，4℃保存。忌未將酶標(biāo)板*平衡至室溫，就放回錫箔紙袋，因為此時由于溫度差，酶標(biāo)板上會有水汽，不利于穩(wěn)定保存。

　　二、預(yù)實驗：通常預(yù)實驗包括全部標(biāo)準(zhǔn)曲線和小量樣本。

　　預(yù)實驗有兩個主要目的，一來是熟悉實驗流程，發(fā)現(xiàn)可能忽略的問題；二來是測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現(xiàn)不匹配的情況，不至于浪費(fèi)過多樣本。另外是對樣品中目的分析物的豐度作一下大致了解，以確定合適稀釋度。

　　三、加樣要快速，避免氣泡

　　加樣時間宜控制在 15 分鐘內(nèi)。加樣前要將樣本混勻，特別是凍存后融化的樣本（自然融化的血清等樣本會有分層現(xiàn)象），應(yīng)上下顛倒充分混勻，注意動作輕緩，避免產(chǎn)生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀，可以再次離心。整個加樣過程都要注意避免產(chǎn)生氣泡。氣泡會影響蛋白的相互結(jié)合，而影響反應(yīng)進(jìn)行。

　　四、孵育時要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干

　　孵育時壓緊封口膜。多塊板一起實驗時，要平放各板，不要疊放，以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應(yīng)。

　　五、手動洗板的操作指南

　　加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板，選用無粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板，使孔內(nèi)沒有可見液體掛壁；但也不能太重，不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。

　　六、顯色反應(yīng)的關(guān)鍵點(diǎn)

　　ELISA試劑盒實驗是個酶促底物顯色反應(yīng)，隨時間增加，顯色變深，所以選擇佳時間終止反應(yīng)是得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣本濃度的重要因素。終止過程要*。使用的 TMB 底物時*終止點(diǎn)是黃色，不會有任何程度的藍(lán)色或綠色，終止過程中必要時可以震蕩96孔板，或用槍頭抽吸混勻（終止液含強(qiáng)酸，避免腐蝕）。